考马斯亮蓝G250

中文名称:考马斯亮蓝G250。二甲花青亮蓝

英文名称:Coomassie Brilliant blue G-250 (C.I. 42655),rilliant blue G 

分子量:854.04 g/mol 

分子式:C47H48N3NaO7S2 

CAS NO.:6104-58-1 

λmax. (buffer pH 7.0):577 – 584 nm 

E 1 %/1 cm, λmax. (pH 7.0):450 – 570 

用途:亮蓝G250,是一种甲基取代的三苯基甲烷,染色灵敏度不如R250,但比氨基黑高3倍,马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,较大光吸收在465nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有较大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。 考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。它在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析。G250常用的蛋白染料,作定性试验用,染色后为蓝绿色

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

  该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。

1.Bradford浓染液的配制:

  将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定。

2.标准曲线蛋白质样本的准备:

  尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗体,可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。

3.溶解:

  将待测样本溶于100~1缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。

4.稀释:

  按1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去。

5.作用:

  每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min.

6.计算:

  根据标准曲线计算待测样本的浓度。

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产品详情

品牌

货号

品名

规格

AppliChem

A3480

Coomassie Brilliant blue G-250 (C.I. 42655)

10g,25g,100g

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