AP标记蛋白/抗体试剂盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)是一种普遍存在的二聚金属酶类,由Suzuki等在1907年首先发现的。生理作用是非特异性水解磷酸单酯键,分子量大小为120kDa,最适pH值为8.6-10.3,因此称为碱性磷酸酶。AP广泛运用于酶联(ELISA)、Western Bloting以及免疫组化技术等,作为多个试剂盒显色体系的关键成分,对试剂盒的质量有重要影响。碱性磷酸酶比活性高,稳定,所以经常被用于抗体或其他蛋白质的标记,而不会影响偶联蛋白的活性和功能。

戊二醛由于具有较低的价格和较高的活性,已成为最常用的用于AP偶联的交联试剂。这种使用戊二醛的AP偶联标记方法已经被广泛认可,但是也存在一定的缺陷,比如在标记时对戊二醛和抗体间的比率非常敏感,不合适的配AP标记蛋白/抗体试剂盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit比可能会导致较低的溶解性和酶活力;同时在标记过程中,也很难避免不同活力的混合物出现,因此在偶联时,待偶联反应发生后需要进行淬灭,纯化并去除多余的交联物;另外,对于待偶联物不同的制备来源和分子量大小,都会对最终的交联反应产生较大的影响。马来酰亚胺(maleimide)也被用于交联反应,其糖基部分可以与巯基反应以形成稳定的偶联物,但是需要提前对偶联抗体或蛋白进行二硫键还原处理。

SureLINK AP Conjugation Kits AP偶联标记试剂盒内提供了一个比上述方法更优秀更快捷的AP偶联方案。其原AP标记蛋白/抗体试剂盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit理是采用双偶联的技术分别对AP和抗体进行交联,如左上图所示。琥珀酰亚胺-4-苯甲酸甲酯Succinimidyl-4-Formyl Benzoate (SFB)的醛基与抗体蛋白结合,同时Succinimidyl 6-hydrazinonicotinate Acetone Hydrazone(SANH)的肼基偶联上AP,这样通过醛基与肼基之间形成稳定的腙键而实现抗体蛋白与AP的偶联。

作为即用型的组分,SureLINK™AP偶联蛋白/抗体试剂盒能在90分钟制备完成标记HRP的抗体或蛋白。制备好的AP标记的抗体或蛋白能在4℃稳定保存至少半年。试剂盒内包括SureLINK Modified AP(干粉)、AP激活及偶联缓冲液、SFB以及AP储存缓冲液。每毫克经SFB修饰的AP可结合0.1-0.5mg抗体或蛋白,特别适合于AP单克隆抗体的制备。经SureLINK AP Conjugation Kits 偶联试剂盒标记的抗体,结合相应的显色或化学发光底物,可应用于ELISA、WB及免疫组化等方法的免疫学检测及定量分析。

SureLINK™ AP标记抗体/蛋白试剂盒具有以下优点:

  • 方便快速:两步反应(见右),近三个小时(20分钟手动工作)就可以完成整个交联反应;
  • 活性强:可以标记从0.05mg到1.5mg范围的抗体(蛋白);
  • 通用性:可以用于下游各种免疫检测实验,比如ELISA, Western blotting和免疫组化
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
SureLINK AP Conjugation Kit 85-00-01 3 x 0.1 mg rxn.
85-00-02 5 x 0.5 mg rxn.
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
SureLINK Modified AP 85-01-01 0.2mg包装
85-01-02 1.0mg包装

除了完整的AP标记抗体/蛋白试剂盒,还有单独组分的SureLINK Modified AP(干粉状的激活AP)提供。

作为美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司,同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统的生产商。 KPL一直提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂及用于蛋白和核酸检测的试剂盒。针对于蛋白标记以及蛋白偶联,KPL有HRP及AP标记及偶联试剂盒,还有专门用于两个蛋白质之间的偶联试剂盒提供。另外还有多种化学发光和显色底物及相关产品,以及全系列针对不同种属的各种标记的现货二抗。如果您对KPL的产品感兴趣,请致电021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司免费索取相关产品资料,或者问询您所感兴趣的产品类型。

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