TARGET标签系统 重组蛋白纯化检测用

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TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

重组蛋白纯化检测用

TARGET标签系统


TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用


◆特点


● 通过树脂再生,降低运作成本

● 温和洗脱、清洗,实现高纯度

● 在动物细胞表达系(HEK293T细胞、CHO细胞等)中有效纯化蛋白


  TARGER标签系统使用的是可识别肽标签(21个氨基酸残基)的单抗(P20.1),是日本开发的亲和纯化标签系统。

  TARGET标签系统实践证明,即使在传统系统都难以进行高纯度蛋白纯化的动物细胞表达系中,也可有效地进行亲和纯化。



◆TARGET标签系统


  A rapid screening method for cell lines producing singly-tagged recombinant proteins using the“ TARGET tag”system. Tabata S. et al., J. Proteomics, 2010 Aug 5;73(9):1777-85.

 


◆TARGET 标签表达载体示意图


TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

 


产品选择


载体

表达模式

宿主细胞

MCS启动子

pEBMulti

非整合型稳定表达

灵长类(人、猴)、狗细胞等贴壁细胞

CAG

pCAG

瞬时表达

灵长类(人、猴)、狗细胞等贴壁细胞、大/小鼠等动物细胞

CAG


和光还推出除上述抗性基因载体外的其他载体。(请点击查看)

测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息,已附在产品随货说明书中。

另外可点击和光主页/TARGET标签,查看序列信息、多克隆位点(MCS)信息。

 

TARGET标签融合蛋白的免疫沉淀

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

通过Transient 载体,

表达TARGET标签融合重组蛋白

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

培养上清(培养第7天)

每10 mL中,分别添加0.1 mL(net 0.05 mL)的抗体磁珠(①抗TARGET标签抗体琼脂糖珠、②抗DYKDDDDK标签抗体琼脂糖珠,其他公司产品),4℃条件下,进行2小时免疫沉淀。

清洗后,在回收的各珠中分别添加0.5 mL 0.2 mg/mL

TARGET标签肽/TBS和0.2 mg/mL DYKDDDDK肽/TBS,4℃条件下,平稳震动0.5小时。离心后回收上清。

再分别在各珠中添加0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl (pH 2.7),室温下,平稳震动5分钟。离心后,回收上清并用1M Tris-HCl (pH 9.0)中和。

上图为SDS-PAGE处理后的银染结果。

与传统DYKDDDDK tag相比,背景更低

→高纯度!

 M:M.W. Marker

 1.仅转染载体的培养上清

 2.转染了蛋白Y-TARGET 标签表达质粒的细胞培养上清

 3.转染了TARGET标签-蛋白Y 表达质粒的细胞培养上清

  也可使用市售的Transient载体



确认非整合型载体TARGET   tag C端融合重组蛋白的表达

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

利用可编码表达人源生理活性蛋白基因的质粒转染HEK293N细胞后,从初期细胞数3×10^5cells/mL开始培养,回收0/3/7日的培养上清。

用20μL/lane的培养上清进行SDS-PAGE处理,通过银染和Western blotting,检测出蛋白的表达。

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

 可确认到与市面售卖的Tag系统有相同的表达量和检测灵敏度。

 


◆TARGET 标签系列


产品名称

子类
克隆号

适用

实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗TARGET标签, 单抗

Anti TARGET tag, Monoclonal Antibody

小鼠IgG1
  P20.1

IP, WB

免疫化学用

016-25481

200 μg

012-25483

1 mg

HRP标签单抗

抗TARGET tag, 单抗, 

过氧化酶结合

Anti TARGET tag, Monoclonal Antibody (P20.1) Peroxidase conjugated

小鼠IgG1   P20.1

WB

免疫化学用

015-25571

200 μL

011-25573

1 mL

产品名称

子类克隆号

规格

产品编号

包装

抗体结合琼脂糖珠

抗TARGET标签抗体琼脂糖珠

Anti TARGET tag Antibody Beads

小鼠IgG1

P20.1

免疫化学用

018-25561

2 mL

(Net 1 mL)

014-25563

10 mL

(Net 5 mL)

012-25564

50 mL

(Net 25 mL)

 识别N端、C端的TARGET标签

 使用载体:4%琼脂糖
 溶液组成:1×TBS (pH 7.5), 0.05 w/v%叠氮化钠
 抗体结合量:2.0 mg/mL
 结合容量:1 mL本品可结合约0.1-1.0 mg的TARGET标签融合蛋白

 


产品名称

备注

规格

产品编号

包装

TARGET标签肽

TARGET tag Peptide

含量(HPLC)95%以上

基因研究用

200-19673

5 mg

208-19674

25 mg

清洗液

TARGET标签清洗液

TARGET tag Washing Solution

已过滤消毒
即用型

基因研究用

208-19831

50 mL

 


产品名称

可选Marker

产品编号

包装

大肠杆菌

动物细胞

瞬时表达载体

C端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体

pCAG-Ble TARGET tag-C

博莱霉素

165-26381

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体

pCAG-Ble TARGET tag-N

博莱霉素

162-26391

20 μg

C端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体

pCAG-Bsd TARGET tag-C

杀稻瘟素S

165-26401

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体

pCAG-Bsd TARGET tag-N

杀稻瘟素S

162-26411

20 μg

C端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体

pCAG-Hyg TARGET tag-C

潮霉素B

169-26421

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体

pCAG-Hyg TARGET tag-N

潮霉素B

166-26431

20 μg

C端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体

pCAG-Neo TARGET tag-C

卡那霉素

G418

163-26441

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体

pCAG-Neo TARGET tag-N

卡那霉素

G418

160-26451

20 μg

游离载体

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体

pEBMulti-Ble TARGET tag-C

博来霉素

167-26461

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体

pEBMulti-Ble TARGET tag-N

博来霉素

164-26471

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Bsd载体

pEBMulti-Bsd TARGET tag-C

杀稻瘟素S

161-26481

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMultI-Bsd载体

pEBMulti-Bsd TARGET tag-N

杀稻瘟素S

168-26491

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体

pEBMulti-Hyg TARGET tag-C

潮霉素B

161-26501

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体

pEBMulti-Hyg TARGET tag-N

潮霉素B

168-26511

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体

pEBMulti-Neo TARGET tag-C

卡那霉素

G418

165-26521

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体

pEBMulti-Neo TARGET tag-N

卡那霉素

G418

162-26531

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体

pEBMulti-Puro TARGET tag-C

氨苄青霉素

嘌呤霉素

169-26541

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体

pEBMulti-Puro TARGET tag-N

氨苄青霉素

嘌呤霉素

166-26551

20 μg



◆相关产品


内参照

下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。


产品名称

规格

产品编号

包装

抗β肌动蛋白单抗
  Anti β-Actin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

013-24553

200 μg

011-24554

1 mg

017-24556

5 mg

抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记

Anti β-Actin, Monoclonal Antibody,   Peroxidase Conjugated

免疫化学用

017-24573

200 μL

抗α-微管蛋白, 单抗

Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

011-25034

10 μg

017-25031

200 μg

013-25033

1 mg

Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody
  抗β-微管蛋白, 单抗

免疫化学用

018-25044

10 μg

014-25041

200 μg

010-25043

1 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody
  抗GAPDH, 单抗

免疫化学用

016-25523

200 μg

014-25524

1 mg

010-25526

5 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase   Conjugated
  抗GAPDH, 单抗, 过氧化酶结合

免疫化学用

015-25473

200 μL

 


蛋白酶抑制剂系列


产品名称

规格

产品编号

包装

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I,无动物源成分(通用型)

Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized

通用型

165-26021

1 mL用

161-26023

1 mL用×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III,   DMSO溶液(不含EDTA)(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution   (EDTA free) (×100)

动物细胞

163-26061

1 mL

169-26063

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V (无EDTA)(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized

2D电泳

162-26031

1 mL

168-26033

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI,DMSO溶液,用于植物(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)

植物细胞

164-26091

1 mL

160-26093

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII,DMSO溶液,组氨酸标签蛋白(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution   (for Histidine-tagged Protein) (×100)

His Tag 纯化

167-26101

1 mL

163-26103

1 mL×5

亲和标签比较表

亲和标签

TARGET

PA

6xHis

氨基酸序列

(YPGQ)5V

GVAMPGAEDDVV

HHHHHH

残基数

21

12

6

分子量 (kDa)

2.34

1.16

0.84

等电点(pI)

5.52

3.49

7.21

配体

TARGET tag

PA tag

Ni, Co, Zn, Cu

亲和珠回收

40% Propyleneglycol,
  1×TBS(pH7.5)

3M MgCl2, MES(pH6.0)

0.5M Imididazole(pH7.4)

单抗边界强度

(KD(M))

1.0×10-8

4.9×10-10

Ni-NTA:
  1.0×10-5~-6

单抗

Clone No.

P20.1(Mouse)

NZ-1(Rat)

Merck:HIS. H8(Mouse)

亲和力

++++

+++++

+++

提纯成本

+

+

+

多肽洗脱

+++

+++

Imidazole

背景

(培养上清)

+

+

+++++

背景

(细胞裂解物)

+

+

++++

亲和标签

DYKDDDDK

c-Myc

HA

GST

氨基酸序列

DYKDDDDK

EQKLISEEDL

YPYDVPDYA

残基数

8

10

9

218

分子量 (kDa)

1.01

1.20

1.10

26

等电点(pI)

3.97

4.00

3.56

配体

DYKDDDDK tag

c-Myc tag

HA tag

GST

亲和珠回收

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

Glutathione,
  Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

单抗边界强度

(KD(M))

2.8×10-8

2.2×10-9

2.8×10-9

Glutathione:
  1.0×10-5~-6

单抗

Clone No.

M2(Mouse)

9E10(Mouse)

3F10(Mouse)
  HA-7(Rat)

Wako:5A7(Mouse)

亲和力

++++

++++

++++

++++

提纯成本

++

++

++

+

多肽洗脱

+++

++

++

Glutathione

背景

(培养上清)

++++

+++

+++

++++

背景

(细胞裂解物)

++++

++++

+++

++++

  本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同,特异性也会有所变化,因此无法保证各个亲和标签的功能。

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级

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