测序级重组胰蛋白酶MTrypsin

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测序级重组胰蛋白酶MTrypsin测序级重组胰蛋白酶MTrypsin



◆概述


胰蛋白酶(Trypsin; EC 3.4.21.4)是一种丝氨酸蛋白酶,酶解赖氨酸及精氨酸C末端形成的肽键。重组猪胰蛋白酶是由重组毕赤酵母表达并采用层析色谱法纯化获得,氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。未经修饰的胰蛋白酶自切降解肽段,可能对蛋白质测序及液质联用质量肽图检测造成干扰,自切降解会造成消化样品过程中酶活性降低,且被证明可能产生胰糜蛋白酶活性。本品为重组表达胰蛋白酶,多步纯化无杂酶活性;经还原甲基化修饰,在蛋白组学及质量肽图研究中,对单独酶切或与Lys-C分步/混合酶切时,对蛋白酶水解具有抵抗力,从而保证其活性高稳定性好。活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如TLCK、PMSF等的抑制,金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。



特点


●  优良的稳定性:0.1 mg/mL测序级胰蛋白酶MTP,于50 mmol NH4HCO3酶切缓冲中37℃水浴反应过夜(15 h),酶活保留超过90%。

●  良好的特异性:利用测序级胰蛋白酶MTP,1:50(w/w)酶切人胰岛素B链,RP-HPLC于214 nm波长检测酶切产物,酶切16 h产物与2 h产物相比,产物肽峰比例增加而个数为2个且不随时间延长增加。



特性


性状    白色或类白色冻干粉

纯度    ≥95%

相对分子量    23 kDa±2.3 kDa

酶比活性    ≥3800 USP/mg 



来源


由重组毕赤酵母表达并采用层析色谱法纯化获得,氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。 



稳定性


酶稳定性对比研究


考察样品均为RTP冻干粉或MTP冻干粉用10 mmol/L HCl或50 mmol/L NH4HCO3溶解的酶溶液(含量为0.1 mg/mL)。


测序级重组胰蛋白酶MTrypsin



使用方法


溶解缓冲:10 mmol/L HCl或CH3COOH,20 mmol/L CaCl2;溶解后分装-15℃以下保存。

酶切缓冲:50 mmol/L Tris-HCl或50 mmol/ NH4HCO3,1 mmol/L CaCl2,pH 7.6~8.0;

推荐条件:50 mmol/L Tris-HCl或50 mmol/ NH4HCO3,1 mmol/L CaCl2酶切缓冲中,1:20~1:100比例与待消化蛋白(含量0.5~1.0 mg/mL)混合,30~37℃进行酶切反应;经变性处理的蛋白,尿素或盐酸胍建议稀释至1 mol/L以下。



应用实例


MTP与RTP用于酶切质量肽图对比


测序级重组胰蛋白酶MTrypsin

获取质谱分子量肽峰个数

备注

MTP(黑色)

13

1:50酶切15 h

RTP(蓝色)

9


保存条件


储存稳定性:冻干粉存于-15℃以下,24个月稳定;HCl或CH3COOH溶解后,分装冻存于-15℃以下。

运输稳定性:冰袋保温运输,活性稳定。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
MTP1504 测序级重组胰蛋白酶MTrypsin 20 μg
MTP1505 测序级重组胰蛋白酶MTrypsin 20 μg×5

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