骨吸收检测试剂盒 Bone Resorption Assay Kit

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骨吸收检测试剂盒骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

Bone Resorption Assay Kit



◆原理

 

骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

       本产品是用于检测骨吸收作用的试剂盒,已预先铺在板上的磷酸钙首先与荧光素标记的硫酸软骨素结合(FACS),加入破骨细胞后,通过细胞的呼吸作用将 FACS 从磷酸钙层释放到培养基中,检测培养基中的荧光强度来评价骨吸收作用。此款试剂盒可用于骨生理代谢、药物评价等方面研究。

 

骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

                BONE RESORPTION ASSAY KIT 24

骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

                   BONE RESORPTION ASSAY KIT 48

骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

 

◆优点特色

 

● 简单快捷——仅需检测荧光强度变化即可评估骨吸收能力

● 操作方便——观察骨吸收后形成的凹洞,仅需移除细胞。

● 准确清晰——可透过显微镜观察细胞形态,并可用图像软件分析吸收效果。

● 创新有效——使用标定荧光的磷酸钙来取代传统的牙质骨片。

● 产品已灭菌,即可使用

 


◆案例应用

 

<药物作用巨噬细胞 RAW264 细胞系后实验检测>

 

1. 剂盒的板里每孔加入 FACS,37℃ 孵育1-2小时。


2. PBS 和培养基漂洗后,加入巨噬细胞 RAW264 细胞

    孵育。培养的细胞已用细胞分化诱导剂。

  (RANKL)和药物处理过(约培养5-6天)。


3. 养基转到 96 孔酶标板中,加入 Assay Buffer。

    在入射光 485 nm、发射光 535 nm 的条件下进行荧

    强度检测。


4. 分析吸收作用效果图,使用5%次氯酸钠处理可移走

    胞,经过漂洗后,用显微镜拍照,最后用图像分析

    分析吸收作用效果图。

骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

注意:(1)使用无酚红培养基。(2)使用时请避光。

检测试剂盒

产品编号

名称

应用

规格

储存

PMC-AK03-COS

Acidic Mucopolysaccaride Assay Kit

定量检测酸性粘多糖

1 kit (100 tests)

4-10℃
勿冻

试剂盒组成

● Chromogenic Solution (4 mL) ——1  bottle 

● Buffer (130 mL) ——1 bottle                  

● Enzyme Powder For Sample Preparation ——5 bottles

● Chondroitin Sulfate Standard Solution (100 µg/mL)(2 mL) —— 1 bottle

PMC-AK20-COS

Alkaline Phosphatase Staining Kit

检测成骨细胞碱性磷酸酶

1 kit (for 12 well plate×10)

4-10℃
勿冻

试剂盒组成

● Chromogenic Substrate ——10 vials                    

● Substrate-containing Buffer (50 mL) ——1 bottle

PMC-AK21-COS

Calcified Nodule Staining Kit

检测成骨细胞钙化结节

1 kit (for 24 well plate×10)

RT

试剂盒组成

● Chromogenic Substrate —— 10 vials                  

● Substrate-containing Buffer (×100)  (60 mL) —— 1 bottle

PMC-AK04F-COS

TRAP Staining Kit
TRAP: 抗酒石酸酸性磷酸酶

检测破骨细胞抗酒 石酸酸性磷酸酶

1 kit(for 24 well plate×10)

4-10℃
勿冻

试剂盒组成

● Chromogenic Substrate——10 vials 每个试剂盒所包含试剂可用于10×96-孔板

● Tartrate-containing Buffer (50 mL)——1 bottle

294-67001

TRAP/ALP Stain Kit

骨代谢研究

60回用

-20℃

PMC-AK02-COS

Stains All Gel Staining Kit

酸性蛋白染色

1 kit (20 test)

RT

 特色:

   酸性蛋白调节骨骼钙化,如骨钙素、骨桥蛋白和 BSP,这些蛋白是骨骼和牙齿的重要成分。但这些酸性蛋白难以通过传统的 SDS-PAGE 凝胶染色来检测。Stains All Gel Staining Kit 是针对这些难染色的强酸性蛋白设计,蛋白条带的颜色取决于蛋白的等电点和化学修饰,如糖基化和磷酸化。

试剂盒组成

● Staining Stock Solution ( ×10) ——40 mL

● Dilution Buffer —— 200 mL×2

CSR-ARD-SET

Calcification Evaluation Set

检测成骨细胞钙化

1 SET

RT

试剂盒组成

● Alizarin Red Solution (CSR-ARD-A1) ——100 mL

● Calcified Nodule Extraction Solution(CSR-ARD-E1) ——100 mL

 

其他

产品编号

名称

检测样本

规格

储存

291-58601

LabAssay ALP

小鼠血清等

900 test

2-10℃勿冻

ALX-850-019-KI01

RANKL (total), soluble  (human) ELISA kit

人血清、血浆、细胞培养液

96 well

 4°C

APO-54N-028-KI01

Osteoprotegerin free (human), detection set

人血清、血浆、细胞培养液

96 well

 4°C

ALX-850-280A-KI01

Osteoprotegerin (human)  ELISA kit

人血清、

血浆

96 well

 4°C

ADI-900-215-0001

25(OH) Vitamin D ELISA kit

人血清、

血浆

96 well

 -20℃

骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

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骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

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骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay KitMethod of Measuring Pit Area.pdf

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骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay KitBRA24KIT_E.20150529.pdf

骨吸收检测板/试剂盒【常见问题】

Q1:    培养基的使用量?
A1:    BONE RESORPTION ASSAY KIT 48×2(CSR-BRA-48X2KIT)按照说明书,该试剂盒需要用分化培养基处理板子。1个板子,48孔,
            每个孔需用 0.5 mL 分化培养基处理,每个孔加入细胞(细胞含有 0.5 mL分化培养基)。1个48孔板合计需要的分化培养基是48 mL。

            2个48孔板,是 96 mL分化培养基。


           Osteoclast Culture Kit V-2 (PMC-OSC12-COS )这个试剂盒中含有25 mL的分化培养基。所以,Osteoclast Culture Kit V-2 

         (PMC-OSC12-COS )里面的分化培养基25 mL是远远不够用于BONE RESORPTION ASSAY KIT 48×2(CSR-BRA-48X2KIT)的检测。


           Osteoclast Culture Kit V-2 (PMC-OSC12-COS )即便里面的分化培养基不含酚红,也需要另外配置。

Q2:    如何配置不含酚红的培养基?
A2:   不含酚红的分化培养基配方:
       1)alpha-MEM(不含酚红),10%胎牛血清,1%双抗,50 ng/mL M-GSF,15 ng/mL RANKL。Osteoclast Culture Kit V-2 中用的也是

            alpha-MEM。
       2)DMEM/F12(不含酚红),10%胎牛血清,1%双抗,50 ng/mL M-GSF,15 ng/mL RANKL。Osteoclast Culture Kit V-2 中用的也是

            alpha-MEM不同。BONE RESORPTION ASSAY KIT 48×2 (CSR-BRA-48X2KIT)试剂盒中用到的。

Q3    在细胞孵育(5~6天)后,最佳的荧光检测时间是什么?什么时候荧光强度开始减弱? 什么时候必须检测荧光强度?

A3:    最佳荧光检测时间取决于细胞和培养状态。所以我们推荐继续使用少量的条件培养基,研究荧光强度的上升曲线。

 

Q4:    板的保质期多久?

A4:    距离发货时间1年。

 

Q5:    板的荧光强度会随时间而减弱吗?

A5:    避光情况下,结合磷酸钙(CaP)的荧光标记硫酸软骨素(FACS)的荧光强度稳定。然而,部分荧光标记硫酸软骨素(FACS)在有培养

     基或者PBS时会被洗脱到培养基内。

 

Q6:    如果我用胰酶消化细胞做 qPCR,磷酸钙(Ca-P)是否影响胰酶消化或者 qPCR 结果?

A6:    非常抱歉,我们没有实验过,也没有相关数据。

 

Q7:    我如何检测 pit?与 TRAP 检测类似吗?需要检测 pit 的深度和宽度吗?(检测 pit 的面积不等于检测破骨细胞消化的 pit 体积)

A7:     Pit 检测(骨吸收活性)与 TRAP 检测不是很相似。按照说明书,pit 检测中细胞的面积是在移除细胞后对板进行拍照测量。实际上,如您

             所说体积不应该在 pit 检测中测量。检测体积也比较困难。因此,pit 面积或者 pit 数目经常检测。

 

Q8:    我该如何洗涤细胞?用缓冲液?检测荧光强度的 pit 实验后。

A8:    用5%的次氯酸钠处理5分钟将细胞从板上移除,然后用水洗涤板,晾干。

 

Q9:    可用 TECAN 的活细胞影像仪器对板进行实时检测?

A9:    通常,我们会在新的 96 孔板内收集条件培养基,检测荧光强度。我们没有在培养过程中检测荧光强度。

 

Q10:    根据说明书,需要使用非酚红培养基培养细胞,我是否可以用其他不含酚红的培养基(不是说明书上提到的培养基)?

              这种培养基是否对细胞有不利影响?能否推荐其他不含酚红的培养基。我比较担心在磷酸钙(CaP)包被的培养板上培养细胞,不含酚红

              的 DMEM 或者其他培养基不能很好的支持细胞培养5天。在将细胞接种在磷酸钙(CaP)包被的培养板之前,我是否可以用含酚红的培

              基培养细胞?我想培养 RAW264.7 细胞和 U937 细胞。另外,5%的次氯酸钠是否也包含在试剂盒里?

A10:    在我们培养体系中,不更换培养基可以培养6天。如果客户担心6天培养的问题,我们推荐他试试在正常培养板中进行同样的培养,确认

              否可以诱导破骨细胞。

              非常抱歉,我们这边没有用除了 DMEM/F-12、αMEM 之外的培养基。可以试试,确认是否能诱导破骨细胞。在最初培养的时候,可以

              含酚红的培养基。但在检测时,需要更换成不含有酚红的培养基。

              5%的次氯酸钠不包括在试剂盒内。

              推荐使用 Sodium Hypochlorite Solution(197-02206,Wako Pure Chemical Industries, Ltd.,)

 

Q11:    是否可用这种板检测正常骨髓破骨细胞分化实验?能否在实验结束时用 TRAP 染色细胞?

A11:    "BONE RESORPTION ASSAY PLATE" 可用于检测破骨细胞的骨吸收活性。破骨细胞的骨吸收活性与破骨前体细胞(骨髓或者 RAW264.7

              细胞系)的骨吸收活性的差别是可以评估的。请注意在使用骨髓来源的破骨前体细胞时细胞 的选择。在骨髓实验中,该实验可能由于含

              其他杂质导致进展不顺利,还可能在破骨细胞诱导时,需要检查 M-CSF 和 RANKL 的浓度是否足量。

 

              TRAP 染色,我们没有这方面的经验,但是可以同时进行骨吸收检测和 TRAP 染色。破骨细胞吸收后,细胞仍然在细胞板上贴壁。如果希

              果清晰,我们推荐单一实验。

 

Q12:    是否可以兼容转染实验?是否会破坏包被?如果兼容的话,推荐什么转染方法?

A12:    在磷酸钙包被的板(CaP)上没有进行转染的实例。

              磷酸钙在细胞板上贴壁很牢。所以,如果没有酸或者强的外力,不会发生剥离。

 

              如果客户是做 siRNA 实验,推荐在转染后使用 CaP 板。因为核酸会吸收 CaP,导致转染效率差。

 

Q13:    板是保存在室温还是4℃?

A13:    室温和4℃ 都可以保存。

 

Q14:    如果不是一次性用完所有的孔,这块板还能再用吗?因为整块板都会放在 37℃ 培养细胞。

A14:    基本上我们不能保证上述使用的效果。但是,如果没有污染的话,未使用的孔都可以再使用。另外看,包被的CaP会和二氧化碳培养箱的

              湿气反应,可能会有点影响。

 

Q15:    是否可用于破骨细胞的检测(说明书是检测的 RAW 细胞)?如何用影像分析软件测量 pit 检测吸收?

A15:    非常抱歉,我们没有检测过不同分化的(成熟的)破骨细胞。如果含有其他细胞,会导致操作困难。

 

 

TRAP 染色试剂盒常见问题

 

Q16:    该款试剂盒是否可用于石蜡包埋的组织?

A16:    非常抱歉,我们没有用这个做过石蜡包埋的组织。如果样品含有福尔马林的话,也不能用。

 

Q17:    操作说明书是可以做 10×96 孔板实验。能否介绍一下使用6孔板的步骤?

A17:    请使用 96 孔板的 30 倍试剂。比如显色试剂的量是 1.5 mL 。

 

Q18:    是否可以染巨噬细胞?

A18:     可以。

 

Q19:    进行免疫荧光实验时,是否可以一起使用?如果可以,请告知实验流程。

A19:    我们没有用该试剂盒同时进行免疫荧光实验。

 

Q20:    如果显色底物溶解的话,在4℃可以保存多久?

A20:    非常抱歉,显色底物不能溶解后保存。最好现配现用。显色底物提供3mg/瓶,有 10 瓶。

 

Q21:    能够提供小包装?

A21:    目前不行。

 


【相关文献】

骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

RANKL-dependent increase of fluorescence intensity of the conditioned medium (left) and pit area (right) from RAW264 cells in fluoresceinamine-labeled chondroitin sulfate (FACS)/ calcium phosphate (CaP)-coated plates (mean ± SD, n = 3, **: p<0.001).

骨吸收检测试剂盒                              Bone Resorption Assay Kit

The inhibitory effects of Pamidronate and β-Estradiol on calcium phosphate resorption induced by RANKL (100 ng/mL) were measured by fluorescence intensity (left) and pit area (right) (mean ± SD, n = 3, *:p<0.05, **: p<0.001).

(摘自参考文献[4])

[1]

Chih-Hsin Kuo et al., arcinogenesis, 34. 11 2600-2609 (2013

[2]

Claire Fabre, Naoya Mimura, Katharyn Bobb, et al., Clin Cancer Res. 18, 4669-4681 (2012)

[3]

Kim J. et al., Cell. Biochem. 113:247-259 (2012)

[4]

Tatsuya Miyazaki. et al., Analytical Biochemistry 410 7-12 (2011)

[5]

Tatsuya Miyazaki. et al., Dental Materials Journal 29 4:403-410 (2010)

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
CSR-BRA-24KIT Bone Resorption Assay KIT 24 1 kit
CSR-BRA-48KIT Bone Resorption Assay KIT 48 1 kit
CSR-BRA-48X2KIT Bone Resorption Assay 48×2 2×1 KIT
CSR-BRA-24P Bone Resorption Assay Plate 24 1 PLATE
CSR-BRA-48P Bone Resorption Assay Plate 48 1 PLATE
CSR-BRA-48X2P Bone Resorption Assay Plate 48×2 2×1 PLATE
CSR-BRA-FACS1 Bone Resorption Assay FACS 13 mL
CSR-BRA-B1 Bone Resorption Assay Buffer 10 mL

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