M30 CytoDEATH™ 抗体

M30 CytoDEATH™ antibodies

由死亡诱导配体或其他刺激引起的细胞凋亡会导致特定半胱天冬酶的激活。随后，凋亡细胞会被内在的自杀程序清除，从而导致 DNA 断裂、细胞核皱缩、细胞骨架重组、细胞质膜起泡、细胞失去贴壁性。

角蛋白18（K18）是Ｉ型中间丝蛋白，是单层和腺上皮细胞的主要成分。在肺、肝脏、前列腺、乳腺，结肠等多种类型的肿瘤中表达，但是淋巴和神经细胞和组织中不存在 K18 。在效应子半胱天冬酶３、６、７和９启动后的细胞凋亡过程中，K18 被裂解成在切割位点上暴露出新表位（NE）的蛋白片段。PEVIVA 的 M30 CytoDEATH™ 抗体用于特异性检测细胞凋亡。

K18 被半胱天冬酶裂解，暴露出可被 M30 CytoDEATH™ 单抗特异性识别的新表位（M30）。K18 的特异性蛋白水解发生在膜不对称破坏和 DNA 断裂之前。大量研究表明，M30 CytoDEATH™ 抗体只会识别细胞凋亡，而不识别活细胞或坏死的细胞。

M30 CytoDEATH™ 抗体在免疫组织化学中的反应性与 TUNEL 检测的细胞凋亡指数有关，在 DNA 双链断裂与细胞凋亡无关的情况下，可显示出更好的可信度。M30 CytoDEATH™ 抗体用于流式细胞术和免疫组织化学研究时，可区分坏死和凋亡的上皮细胞，这已经在多个病例中得到证实。

所以说，M30 CytoDEATH™ 抗体是用于检测上皮来源单细胞和组织切片中早期到晚期阶段的细胞凋亡的便捷、可靠的工具。

◆原理

细胞凋亡过程中很多内源性蛋白发生水解。介导这些水解的酶主要是 caspase。其中 caspase 的主要底物是上皮细胞表达的角蛋白18（K18，Cytokeratin 18 或者CK18）（Caulin et al., 1997）。

M30 CytoDEATH™ 抗体识别经 caspase 催化水解角蛋白18后在角蛋白Asp396处形成的新表位（K18 Asp396-NE, M30 新表位）（Leers et al., 1999）。M30 CytoDEATH™ 不结合正常细胞来源的天然，非修饰的 K18。M30 CytoDEATH™ 可检测上皮细胞和上皮细胞来源的组织部分凋亡。

M30 CytoDEATH™ 抗体可用于免疫组化实验（福尔马林固定、石蜡包埋的切片和冰冻切片），免疫细胞组化和流式。M30 CytoDEATH™ 的阳性对照是凋亡细胞的胞质。

◆案例・应用

 

PEVIVA M30 CytoDEATH™ 免疫组化结果

M30 CytoDEATH™ unlabeled

 

图 – 检测人结肠癌组织样品中经福尔马林固定和石蜡包埋处理的组织切片中的细胞凋亡时，使用 PEVIVA M30 CytoDEATH™ 对被半胱天冬酶裂解的角蛋白18（ccK18）进行的细胞质选择性染色。二抗使用抗小鼠 IgG 生物素标记，以链霉亲和素-POD 和 AEC 为底物，使用苏木精复染。

图片由 Dr. Marius Nap, Heerlen, the Netherlands 提供。

PEVIVA的 M30 CytoDEATH™ 生物素标记抗体

M30 CytoDEATH™ Biotin mAb

图 – 福尔马林固定，石蜡包埋的人结肠癌组织样品检测细胞凋亡，胞质部分用 PEVIVA 的 M30 CytoDEATH™ 染色 caspase-cleaved 角蛋白18（ccK18）。二抗用抗小鼠 IgG（生物素标记），亲和素-POD，AEC 作为底物。苏木精复染。

图片由 Dr. Marius Nap, Heerlen, the Netherlands 提供。

M30 CytoDEATH™ 荧光素标记抗体

M30 CytoDEATH™ Fluorescein mAb

图– Hela 细胞用 CHX 和 TRAIL 处理后显示长久和很强的 caspase 活性，用 PEVIVA 的 M30 CytoDEATH™ 荧光素抗体检测（A）caspase-cleaved K18 的积累，与单独用非毒性低浓度 CHX 处理的样品对比（B）。 

更多运用案例

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